SEM掃描電鏡的具體生物樣品制備方法介紹
日期:2024-02-19 13:38:57 瀏覽次數(shù):103
掃描電鏡(SEM)生物樣品制備方法主要包括以下幾個步驟:
取樣和固定:用無菌剪刀從目標位置剪下生物樣品,通常選擇大小為2mm直徑左右的樣品。然后,將樣品放入含有2.5%戊二醛的離心管中,置于4℃冰箱中固定1.5小時。
沖洗:用磷酸緩沖溶液(pH=6.8)沖洗樣品3次,每次10分鐘。在沖洗過程中,使用注射器吸走上一步驟的沖洗液。
脫水:分別用濃度為50%、70%、80%、90%的乙醇對樣品進行脫水處理,每次10~15分鐘。然后,用****的乙醇脫水3次,每次10~15分鐘。
置換:將樣品分別用****乙醇、乙酸異戊酯=1:1和純乙酸異戊酯進行置換,每次15分鐘。
干燥:使用CO2臨界點干燥儀對樣品進行干燥。
粘樣:用導(dǎo)電膠布將樣品觀察面向上粘貼在掃描電鏡鋁板上,然后放入干燥器內(nèi)。
噴金:使用B離子濺射鍍膜儀在樣品表面鍍上一層1500nm厚度的Au膜。
進樣和觀察:將樣品固定在掃描電子顯微鏡的進樣室,調(diào)整好樣品角度后,將進樣室推入機器內(nèi)。根據(jù)預(yù)設(shè)的電壓和高度,開始抽真空,并使用SEM對樣品進行拍照。
以上步驟完成后,就可以得到適用于SEM觀察的生物樣品。請注意,每一步操作都需要精確控制,以確保樣品的完整性和觀察的準確性。
此外,對于不同類型的生物樣品和觀察目標,可能需要對上述步驟進行適當?shù)恼{(diào)整。例如,對于粉末樣品,可以直接將其固定在導(dǎo)電膠帶或液體導(dǎo)電膠上,注意控制樣品的撒布時間和方式,以獲得更好的觀察效果。
總的來說,SEM掃描電鏡的生物樣品制備方法需要綜合考慮樣品的性質(zhì)、觀察目標和設(shè)備要求,以確保樣品的制備質(zhì)量和觀察的準確性。
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